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原位杂交仪良好的温度控制功能,确保FISH操作更具稳定性

2022-06-24 14:59:26

荧光原位杂交技术是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示核酸序列位置的方法。该技术问世与70年代中期左右,其曾多于与染色体异常的研究,近年来随着FISH探针种类的不断增多,使得该技术逐步应用于各种领域。该技术具有快速,安全,灵敏度高以及探针可长期保存等特点,目前已广泛应用于细胞遗传学,肿瘤生物学,基因定位,基因作图,基因扩增及分子诊断等领域。


FISH,荧光原位杂交。目前广泛应用于:


(一)基因(或DNA片段)染色体定位和基因图谱绘制


(二)发现染色体数目与结构异常,广泛应用于快速产前诊断


(三)血液肿瘤学


(四)实体肿瘤学

荧光原位杂交仪厂家

对于FISH操作来说,那些因素比较重要?


在FISH中很重要的因素是温度、光照、湿度和各种试剂的PH值。温度和湿度直接影响着探针和目标DNA的杂交效率;光照影响了荧光染料的强度,因此探针要避光保存,其已经杂交的片子可用防荧光淬灭剂封片且避光保存;各种试剂pH也要达到要求,这也直接关系到FISH的稳定性。


如何确保FISH操作中的温度?


较佳的措施是使用一些FISH的专用仪器进行操作,比如佰泉的原位杂交仪。如果是手工操作,首先要对FISH操作过程中可能使用的一些仪器进行温控能力的检查,如水浴锅、孵箱,对其中不符合要求的要进行更换(疾病诊断中的探针要求温控精度在0.5度以内)。其次,要尽可能地保持操作环境温度在20度以上,对于在冬季进行的FISH操作尤为重要。此外对于需要预热以达到要求温度的试剂,在使用前必须使用温度计对其进行测温。同时检测的样本尽量不能超过4块。操作中的行动一定要迅速。操作者还往往忽视一些小部件的温度,诸如载玻片和盖玻片。特别是在冬季,盖玻片本身温度就低,加之探针的量本就不多(10ul),因此事先没有预热的盖玻片会使得杂交液的温度急剧下降严重地影响了探针和目标DNA的杂交效率。因此对上述小部件的要进行预热处理,不然会影响FISH的杂交效果。


FISH 技术作为连接分子生物学与细胞生物学的桥梁地位已为世人所公认。尽管目前FISH技术无法达到完全的杂交,特别是在应用较短cDNA探针时存在杂交效率明显下降的问题,但随着各种新型分子探针以及精度更高的光学显微镜和功能强大的计算机分析系统的不断问世,上述问题将会逐步得到解决,该技术的作用正变得日益重要,应用领域也得以不断扩展。FISH技术在泌尿系统肿瘤研究领域的巨大潜力与光明前景将带领我们进入全新时代。

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